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全球觀察:高通量測序技術(shù)_高通量測序技術(shù)中的 ldquo 高通量 rdquo 是什么意思

1、高通量是相對于第一代測序的,第一代測序只能一次測1個樣品的1段序列,產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量相對來說很小,而高通量測序一次能夠產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量在幾十G上百G,可以一次測很多的樣本。


(相關(guān)資料圖)

2、在2000年的時候,3700、MegaBace等儀器上的測序也是高通量測序,是相對手工測序或者跑平板膠來說的。

3、不過到2005年以后,高通量測序就改指第二代測序(Next generation sequencing),454、Solexa(后改為Illumina)和SOLiD等第二代測序,比3730等第一代測序的通量提高了成千上萬倍,甚至上億倍,所以稱為高通量測序。

4、擴展資料原理:測序方案建立在雙脫氧測序法(Sanger等,1977)的基礎(chǔ)上。

5、為了從每一克隆插入片段兩端成對地進行測序,每一個質(zhì)粒模板DNA板應(yīng)配備兩個384孔循環(huán)測序反應(yīng)板。

6、測序反應(yīng)采用Big Dye Terminator chemistry version 3.1(AppliedBiosystems)和標準M13或常用正向引物和反向引物。

7、測序反應(yīng)通過BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。

8、機械臂負責(zé)等分模板試樣,起與反應(yīng)液混合的作用,反應(yīng)液含有雙脫氧核苷酸、熒光標記的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和緩沖液。

9、模板和反應(yīng)板有條形碼,且在BiomekFX移液操作工作站上有條形碼讀取器跟蹤,確保模板和反應(yīng)液轉(zhuǎn)移中沒有錯誤。

10、30~40線性擴增步驟連續(xù)循環(huán)在MJResearchTetrads或9700熱循環(huán)儀(Ap—pliedBiosystems)中進行。

11、參考資料來源:百度百科-基因組高通量測序。

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